一、番紅固綠染色原理

番紅固綠染色原理是一種組織學(xué)染色方法，常用于對(duì)組織切片中膠原纖維和肌纖維進(jìn)行染色。該方法的原理是：組織切片首先經(jīng)過(guò)甲醛等固定劑固定，然后使用番紅（Ponceau S）染色，番紅可染色蛋白質(zhì)和膠原纖維，使它們變?yōu)榉奂t色。接下來(lái)再用酸性綠染色劑染色，酸性綠主要染色肌肉纖維，使它們呈綠色。經(jīng)過(guò)兩種染色后，膠原纖維和肌肉纖維就可以清晰地區(qū)分出來(lái)，呈現(xiàn)出不同的顏色，使組織結(jié)構(gòu)更加明顯。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

1 脫蠟

1) 70 ℃烤片30 min；

2) 二甲苯（I）中脫蠟10 min；

3) 二甲苯（II）中脫蠟10 min；

4) 100%乙醇（I）中5 min洗去二甲苯；

5) 100%乙醇（II）中5 min洗去二甲苯；

2 水化

1) 95%乙醇中水化5 min；

2) 85%乙醇中水化5 min；

3) 75%乙醇中水化5 min；

4) 蒸餾水中水化待用；

3 染色

1) 番紅染色1-2 h；

2) 流水稍洗；

3) 固綠染色1min 左右；

4 脫水#

1) 無(wú)水乙醇脫水5 min；

2) 無(wú)水乙醇脫水5 min；

5 透明

1) 二甲苯（I）透明5 min；

2) 二甲苯（II）再次透明5 min；

6 封片

在石蠟切片的中央滴加一滴中性樹膠，蓋上蓋玻片封固。

7鏡檢

顯微鏡下觀察拍照。

三、番紅固綠染色要注意什么

番紅固綠染色是一種較為簡(jiǎn)單的染色方法，但在進(jìn)行染色過(guò)程中，還是有一些需要注意的事項(xiàng)：

固定時(shí)間要適當(dāng)：組織切片在進(jìn)行染色前需要用固定劑進(jìn)行固定，固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短都會(huì)影響染色效果。固定時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞變性、膠原纖維變硬、失去染色能力，而固定時(shí)間過(guò)短會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞和組織結(jié)構(gòu)失去完整性，影響染色效果。

染色劑的使用量要合適：番紅和酸性綠的使用量要根據(jù)組織切片的大小適當(dāng)調(diào)整，過(guò)多或過(guò)少都會(huì)影響染色效果。通常情況下，每次使用的染色劑量要比組織切片的體積多一些，以充分覆蓋整個(gè)組織切片。

染色時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)：番紅固綠染色時(shí)間一般在10-20分鐘之間，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致顏色變深，影響觀察效果。

染色后要徹底洗滌：染色后要用大量的蒸餾水和乙醇洗滌組織切片，去除多余染色劑，否則會(huì)影響觀察效果。

染色后要及時(shí)封片：染色后的組織切片要盡快進(jìn)行封片，以避免染色劑的揮發(fā)和蒸發(fā)，影響染色效果。

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